日期: 2026年7月24日

本文内容：封片5天后成像质量对比 整体来说，封片5天后干片样本质量依旧高于封片剂样本，这个结果与5天前直接拍摄的结果一致。 在对比图中我们可以很直观的看到，干片样本5天内亮度衰减可忽略。（但是微丝细节流失同样存在，后续有成像说明） 普通固定液相比五天前微丝细节有损失，5天后有些微丝细节已经淹没在背景之中，只不过亮度没有衰减。 微丝细节保存能力，高保真固定液显著高于普通固定液。

本文内容： 高保真微丝固定液和普通固定液以及4种封片剂对微丝细节的形貌保存的效果对比。 实验文档： 高保真微丝固定液质检报告-云文档 20260526-Product QC-高保真微丝固定液质量检测报告+干片 vs 封片对微丝的保留程度（暨 微丝固定液质检报告 [图片] 如图所示，S01及S02干片封片显著高于封片剂封片的成像信号亮度，我们可以得出结论，干片封装比封片剂封片效果更好。 从图表上看，S01与S02信号亮度相差不大，甚至使用常规固定液的S01亮度还略高于使用超分辨级高保真分辨率。重点是微丝保存的细节，高保真固定液保留的细节远多于常规固定液。我们观察下图，就能看出两种固定液的差别。 [图片] [图片] [图片] [图片] 左侧S01细胞的微丝结构细节模糊，尤其在扇形区域基本上微丝都消失了，只剩一些粗的应力纤维。而右侧高保真固定液拍摄的微丝细节丰富，结构保存明显提升。

封片环节： 6.1 一号封片剂 第一种封片剂： 6.1.1 直接用枪头去吸，不要用滴管，精准吸出20µl，滴加在载玻片上 6.1.2 大拇指和食指捏住玻片两侧，有细胞的那一面面向自己。 6.1.3 倒扣爬片，准备让有细胞的一面贴合封片剂。用镊子轻轻侧着放下去，让爬片与有张力的液体表面先接触，爬片就会无气泡覆盖到载玻片上。 6.1.4 轻轻调整爬片位置，在玻片上摆正。 Tips1：一定不能保留气泡，要用镊子或枪头把气泡处理掉。

本文内容： 清洗染料——注入后固定液——擦拭封片剂——清洗固定液——吸掉水珠 5.1 清洗染料 每一个湿盒上面附有水蒸气，对湿盒进行染料清洗 5.1.1 沿着小皿侧边加入PBS缓冲液 5.1.2 用镊子把制样伴侣夹出来 5.1.3 重复快洗两次（染料不用清洗 5min） 清洗用具： 制样PBS和无菌水。 Tips1：无菌水、PBS必须使用严格无菌无内毒素的，PBS溶液的PH值需准确。 Tips2：加入PBS缓冲液，制样伴侣会自己飘起来。 Tips3：在小皿边缘加PBS溶液，不要对着中间有细胞的区域冲洗。 Tips4：加入PBS溶液后再用镊子夹起制样伴侣。 Tips5：用镊子挑边儿，夹出制样伴侣，不要触碰到细胞爬片以免划伤细胞。

🔬 实验名称：高保真固定液与 4 种封片剂对微丝结构细节保存的影响 🎯 本章内容：清洗、滴染料、贴膜、孵育过夜 固定完成后，进入免疫荧光标记阶段：清洗、滴染料、贴膜、喷盖子、倒扣小皿、4℃ 过夜孵育。一、用 PBS 快洗固定后的样品 3 遍，PBS 质量要求，无菌、新鲜、pH 值准确。PBS 小份相对大桶 PBS，即用即开，更容易保持无菌无内毒素。

本文主要内容：加固定液 1 拿出活细胞，吸出培养基，分别加入预热好的常规固定液和高保真微丝固定液 [图片] 2 放到金属浴保温，设定时间十分钟 [图片] 3 循环操作剩余样品 [图片] 固定要点： 温度不能变，设定为37℃（实际设定为38.5℃，按照室温浮动设定） 添加固定液时不要冲着培养皿中间加，培养皿中间有个细胞爬片，要贴着皿壁加进去，避免冲刷到细胞。

本文主要内容：配置封闭打孔液、配置染料、配置后固定液 1 配置封闭打孔液: 1.1 封闭液： 旨在减少抗体与样本的非特异性结合问题，降低背景荧光，突出信号；免疫荧光实验中的“样本”表面，除了靶标特异性抗原外，还存在大量“空白”区域。可能有电荷或具有疏水性，粘附蛋白抗体；也可能含有一些细胞表达的 Fc受体、固定剂交联物、细胞碎片等，他们都会吸附抗体，产生假阳性信号。在加入一抗之前以及在一抗、二抗孵育的过程中，都用非特异性的、非反应性的蛋白质孵育样本，通过占位和竞争，饱和占据非特异性位点，将特异性的抗原表位留给真正需要结合的一抗和二抗。 1.2 打孔液： 旨在解决抗体进入细胞内部的效率问题，增加标记的丰度。细胞膜和核膜是磷脂双分子层构成的天然屏障，它们只允许小分子或特定物质通过，大分子如抗体（通常是150 kDa左右）无法自由穿透。打孔剂的作用是破坏细胞膜的完整性，在膜上形成微小的孔洞。