⭐️图像描述：
图像是细胞局部，单根微管的2D MINFLUX成像，位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域，Z 轴是细胞的最低处。微管网络稀疏，背景干净。标记密度高，采样数充足，分辨率高，可以看到清晰的微管蛋白在整根微管上的分子分布。
⭐️标记要点：
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
4、为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
成像案例
⭐️图像描述：
图像是细胞局部微管网络的3D STORM 成像，位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域，Z 轴是细胞的最低处。微管网络稀疏，背景相对干净，有局部离散的tubulin蛋白。标记密度高，采样数充足，分辨率高。颜色用于区分不同的Z轴高度。
⭐️标记要点：
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
4、为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
5、使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐ 图像描述：
图像是细胞局部的微管网络，Z 轴位于细胞内部的中高处，位置是靠近细胞核，也靠近微管组织中心的微管致密区域。微管致密但根根分明，丝状结构清晰且连续，分布在 3D 范围内。颜色代表 Z 轴高度。
⭐ 标记要点：
培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐ 图像描述：
图像是细胞局部微管网格的2D STORM 成像，位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域，Z 轴是细胞的最低处。微管网稀疏，背景干净，标记密度高，采样数充足，分辨率高，可以看到清晰的微管中空结构。
⭐ 标记要点：
培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
微管是对温度极其敏感的细胞器， 从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
追求极致干净的细胞内背景，需要对细胞质进行抽提，去除细胞质中游离的 tubulin 蛋白，它们也可以被标记从而形成背景。
项目详情：
华东师范大学-黄正齐老师定制项目
标记原料记录
Acti-Stain 555 Phalloidin
https://www.cytoskeleton.com/phdh1
Alexa Fluor™ 532鬼笔环肽
激发/发射波长：531/554 nm
[图片]
https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/A22282
In DMSO，150ul 66um stock
In methano，1.5ml 6.6um stock
选择用methano溶解，需要做浓度titration
MAN0001777_Phalloidins_UG.pdf
检测设备Olympus FV3000
一、【制样原料和环境条件留档】
1.1 原料照片
1.2 环境条件留档：
说明
异常情况备注
环境温度
25℃
环境湿度
30%
染色时工作液温度
25 ℃
偏低，约等于室内温度
染料储存方式
4℃
染料储液浓度
1mM
抗体储存方式
-20℃
抗体储液浓度
1mg/ml
样本类型和名词
BSC1载玻片
样本前处理操作
8%PFA+1.5%GA固定
⭐ 图像描述：
活细胞共聚焦成像，整个细胞呈现出圆扇形，扁平地铺展在视野中，细胞间的微管呈辐射状排列，连续、均匀、明亮。这是一张 2D 共聚焦成像时间序列，自定义颜色区分亮度，绿色代表信号较高的区域，紫色代表信号较低的区域。
⭐ 标记要点：
梯度测试染料浓度，在无明显细胞毒性情况下，尽可能增加染色浓度和时间；
使用无血清培养基染色，避免血清吸附染料，降低有效染色浓度；
使用标记辅助剂增加标记效率，抑制离子泵外排细胞内的染料；
染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时，使细胞吐出胞内多余染料；
细胞状态和活性极其重要，需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。
⭐️图像描述：整个细胞呈现出圆扇形，扁平地铺展在视野中， 细胞内的微管呈辐射状排列，连续、均匀、明亮。这是一张3D成像的2D投影图，通过颜色信息区分高度，灰色代表细胞较低的区域，橘色代表较高的区域。
⭐️标记要点：
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
4、为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
5、使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐️成像要点：
1、细胞存在异质性，要避开处于分裂期的细胞。教科书般的辐射状细胞，在一盘细胞中通常仅占5%~7%，精心挑选视野。