案例07：高保真超分辨级样本-细胞微丝的 3D Confocal 成像

⭐ 图像描述：

图像是整个细胞的 3/4 区域，主要选取了细胞圆扇形的胞体和延伸出的板状伪足。细胞胞体扁平地铺展在视野中，细胞内的微丝呈现多种丰富的表征：有蛛网状、线状、点状、不同形态纵横交错；微丝的细节连续、均匀、明亮。这是一张 3D 成像的 2D 投影图，通过颜色信息区分高度，橘色代表较低的区域，灰色代表细胞较高的区域。

⭐ 标记要点：

1. 选用适合微丝的高保真固定液，避免微丝解聚。
2. 微丝是对温度极其敏感的细胞器。从培养基取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3. 微丝聚合物仅有 5nm，尽可能减少步骤以保护精细纳米结构。
4. 使用比常规推荐浓度更高的染料浓度去进行过饱和标记。过饱和标记，长时间标记。
5. phalloidin 染料的发光对 PH 敏感，避免任何污染和 PH 波动。
6. phalloidin 染料与部分封片剂不适配，尽量避免封片；若需要封片，请谨慎测试封片剂。

✨ 成像要点：

1. 微丝结构多变，大视野传图应兼顾结构丰富性和细胞形态，且尽量选择扁平圆扇形的细胞。
2. 锁焦/准焦：恒温在显微镜上放置十分钟，温度变化和机械形变全部趋于稳定，更利于锁焦。
3. 选取 3D 拍摄范围：拍摄近的 7 层以上（for 3D 去卷积）细胞扁平，step 设置 0.05-0.1 μm。