⭐️图像描述：
图像是整个细胞的 3/4 区域，主要选取了细胞圆扇形的胞体和延伸出的板状伪足。细胞胞体扁平地铺展在视野中，细胞内的微丝呈现多种丰富的表型：有蛛网状、线状、点状、不同形态纵横交错，微丝的细节连续、均匀、明亮。这是一张3D成像的2D投影图，通过颜色信息区分高度，橘色代表较低的区域，灰色代表细胞较高的区域。
⭐️标记要点：
1、选用适合微丝的高保真固定液，避免微丝解聚
2、微丝是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动
3、微丝聚合物仅有5nm，尽可能减少步骤以保护精细纳米结构
4、使用比常规推荐浓度更高的染料浓度去进行过饱和标记。过饱和标记，长时间标记
5、phalloidin染料的发光对PH敏感，避免任何污染和 PH 波动
6、phalloidin染料与部分封片剂不适配，尽量避免封片；若需要封片，请谨慎测试封片剂。
学员案例
⭐️图像描述：
图像是整个细胞的 4/5 区域。主要选取了细胞圆扇形的胞体和延伸出的板状伪足。细胞胞体扁平地铺展在视野中，细胞内的微丝呈现出应力纤维和细丝表型，微管辐射状。细胞骨架呈现出向心运动的趋势。
微丝：盈盈；微管：橘色；
⭐️标记要点：
1、梯度测试染料浓度，在无明显细胞毒性情况下，尽可能增加染色浓度和时间；
2、使用无血清培养基染色，避免血清吸附染料，降低有效染色浓度；
3、使用标记辅助剂增加标记效率，抑制离子泵外排细胞内的染料；
4、染色完毕后使用完全培养基培养“清洗”染料6-12小时，使细胞吐出胞内多余染料
5、细胞状态和活性极其重要，需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。
⭐️图像描述：
图像是细胞局部的微丝网络，Z 轴位于细胞内部的边缘扁平处，位置是靠近细胞板状伪足区域。微丝的应力纤维致密但根根分明，丝状结构清晰且连续，分布在 3D 范围中。颜色代表 Z 轴高度。
⭐️标记要点：
1、选用适合微丝的高保真固定液，避免微丝解聚
2、微丝是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动
3、微丝聚合物仅有5nm，尽可能减少步骤以保护精细纳米结构
4、使用比常规推荐浓度更高的染料浓度去进行过饱和标记。过饱和标记，长时间标记
5、phalloidin染料的发光对PH敏感，避免任何污染和 PH 波动
6、phalloidin染料与部分封片剂不适配，尽量避免封片；若需要封片，请谨慎测试封片剂。
⭐ 图像描述：
图像选取了细胞圆扇形的胞体，细胞胞体扁平地铺展在视野中，呈现和谐的圆形。细胞内的微丝呈现应力纤维和细丝的表型，微管辐射状。整个细胞骨架呈现小范围的摆动，支撑着细胞圆周对称的结构。
微丝：蓝色；微管：紫色。
⭐ 标记要点：
梯度测试染料浓度，在无明显细胞毒性情况下，尽可能增加染色浓度和时间；
使用无血清培养基染色，避免血清吸附染料，降低有效染色浓度；
使用标记辅助剂增加标记效率，抑制离子泵外排细胞内的染料；
染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时，使细胞吐出胞内多余染料；
细胞状态和活性极其重要，需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。
⭐️图像描述：
图像是细胞局部，单根微管的2D MINFLUX成像，位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域，Z 轴是细胞的最低处。微管网络稀疏，背景干净。标记密度高，采样数充足，分辨率高，可以看到清晰的微管蛋白在整根微管上的分子分布。
⭐️标记要点：
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
4、为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
⭐️图像描述：
图像是细胞局部微管网络的3D STORM 成像，位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域，Z 轴是细胞的最低处。微管网络稀疏，背景相对干净，有局部离散的tubulin蛋白。标记密度高，采样数充足，分辨率高。颜色用于区分不同的Z轴高度。
⭐️标记要点：
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
4、为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
5、使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐ 图像描述：
图像是细胞局部的微管网络，Z 轴位于细胞内部的中高处，位置是靠近细胞核，也靠近微管组织中心的微管致密区域。微管致密但根根分明，丝状结构清晰且连续，分布在 3D 范围内。颜色代表 Z 轴高度。
⭐ 标记要点：
培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐ 图像描述：
图像是细胞局部微管网格的2D STORM 成像，位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域，Z 轴是细胞的最低处。微管网稀疏，背景干净，标记密度高，采样数充足，分辨率高，可以看到清晰的微管中空结构。
⭐ 标记要点：
培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
微管是对温度极其敏感的细胞器， 从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
追求极致干净的细胞内背景，需要对细胞质进行抽提，去除细胞质中游离的 tubulin 蛋白，它们也可以被标记从而形成背景。
⭐ 图像描述：
活细胞共聚焦成像，整个细胞呈现出圆扇形，扁平地铺展在视野中，细胞间的微管呈辐射状排列，连续、均匀、明亮。这是一张 2D 共聚焦成像时间序列，自定义颜色区分亮度，绿色代表信号较高的区域，紫色代表信号较低的区域。
⭐ 标记要点：
梯度测试染料浓度，在无明显细胞毒性情况下，尽可能增加染色浓度和时间；
使用无血清培养基染色，避免血清吸附染料，降低有效染色浓度；
使用标记辅助剂增加标记效率，抑制离子泵外排细胞内的染料；
染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时，使细胞吐出胞内多余染料；
细胞状态和活性极其重要，需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。
⭐️图像描述：整个细胞呈现出圆扇形，扁平地铺展在视野中， 细胞内的微管呈辐射状排列，连续、均匀、明亮。这是一张3D成像的2D投影图，通过颜色信息区分高度，灰色代表细胞较低的区域，橘色代表较高的区域。
⭐️标记要点：
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程，必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液，防止微管解聚。
4、为使背景更干净，使用Quench试剂来抑制自发荧光。
5、使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐️成像要点：
1、细胞存在异质性，要避开处于分裂期的细胞。教科书般的辐射状细胞，在一盘细胞中通常仅占5%~7%，精心挑选视野。