⭐ 图像描述:
图像选取了细胞圆扇形的胞体,细胞胞体扁平地铺展在视野中,呈现和谐的圆形。细胞内的微丝呈现应力纤维和细丝的表型,微管辐射状。整个细胞骨架呈现小范围的摆动,支撑着细胞圆周对称的结构。
微丝:蓝色;微管:紫色。
⭐ 标记要点:
梯度测试染料浓度,在无明显细胞毒性情况下,尽可能增加染色浓度和时间;
使用无血清培养基染色,避免血清吸附染料,降低有效染色浓度;
使用标记辅助剂增加标记效率,抑制离子泵外排细胞内的染料;
染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时,使细胞吐出胞内多余染料;
细胞状态和活性极其重要,需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。
年度归档: 2026 年
⭐️图像描述:
图像是细胞局部的微丝网络,Z 轴位于细胞内部的边缘扁平处,位置是靠近细胞板状伪足区域。微丝的应力纤维致密但根根分明,丝状结构清晰且连续,分布在 3D 范围中。颜色代表 Z 轴高度。
⭐️标记要点:
1、选用适合微丝的高保真固定液,避免微丝解聚
2、微丝是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程,必须严格避免温度波动
3、微丝聚合物仅有5nm,尽可能减少步骤以保护精细纳米结构
4、使用比常规推荐浓度更高的染料浓度去进行过饱和标记。过饱和标记,长时间标记
5、phalloidin染料的发光对PH敏感,避免任何污染和 PH 波动
6、phalloidin染料与部分封片剂不适配,尽量避免封片;若需要封片,请谨慎测试封片剂。
⭐️图像描述:
图像是整个细胞的 4/5 区域。主要选取了细胞圆扇形的胞体和延伸出的板状伪足。细胞胞体扁平地铺展在视野中,细胞内的微丝呈现出应力纤维和细丝表型,微管辐射状。细胞骨架呈现出向心运动的趋势。
微丝:盈盈;微管:橘色;
⭐️标记要点:
1、梯度测试染料浓度,在无明显细胞毒性情况下,尽可能增加染色浓度和时间;
2、使用无血清培养基染色,避免血清吸附染料,降低有效染色浓度;
3、使用标记辅助剂增加标记效率,抑制离子泵外排细胞内的染料;
4、染色完毕后使用完全培养基培养“清洗”染料6-12小时,使细胞吐出胞内多余染料
5、细胞状态和活性极其重要,需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。
⭐️图像描述:
图像是整个细胞的 3/4 区域,主要选取了细胞圆扇形的胞体和延伸出的板状伪足。细胞胞体扁平地铺展在视野中,细胞内的微丝呈现多种丰富的表型:有蛛网状、线状、点状、不同形态纵横交错,微丝的细节连续、均匀、明亮。这是一张3D成像的2D投影图,通过颜色信息区分高度,橘色代表较低的区域,灰色代表细胞较高的区域。
⭐️标记要点:
1、选用适合微丝的高保真固定液,避免微丝解聚
2、微丝是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程,必须严格避免温度波动
3、微丝聚合物仅有5nm,尽可能减少步骤以保护精细纳米结构
4、使用比常规推荐浓度更高的染料浓度去进行过饱和标记。过饱和标记,长时间标记
5、phalloidin染料的发光对PH敏感,避免任何污染和 PH 波动
6、phalloidin染料与部分封片剂不适配,尽量避免封片;若需要封片,请谨慎测试封片剂。
⭐️图像描述:
图像是细胞局部,单根微管的2D MINFLUX成像,位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域,Z 轴是细胞的最低处。微管网络稀疏,背景干净。标记密度高,采样数充足,分辨率高,可以看到清晰的微管蛋白在整根微管上的分子分布。
⭐️标记要点:
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程,必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液,防止微管解聚。
4、为使背景更干净,使用Quench试剂来抑制自发荧光。
⭐️图像描述:
图像是细胞局部微管网络的3D STORM 成像,位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域,Z 轴是细胞的最低处。微管网络稀疏,背景相对干净,有局部离散的tubulin蛋白。标记密度高,采样数充足,分辨率高。颜色用于区分不同的Z轴高度。
⭐️标记要点:
1、培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
2、微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程,必须严格避免温度波动。
3、选用适合微管的高保真固定液,防止微管解聚。
4、为使背景更干净,使用Quench试剂来抑制自发荧光。
5、使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐ 图像描述:
图像是细胞局部的微管网络,Z 轴位于细胞内部的中高处,位置是靠近细胞核,也靠近微管组织中心的微管致密区域。微管致密但根根分明,丝状结构清晰且连续,分布在 3D 范围内。颜色代表 Z 轴高度。
⭐ 标记要点:
培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
微管是对温度极其敏感的细胞器。从培养箱取出到固定的全过程,必须严格避免温度波动。
选用适合微管的高保真固定液,防止微管解聚。
为使背景更干净,使用Quench试剂来抑制自发荧光。
使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
⭐ 图像描述:
图像是细胞局部微管网格的2D STORM 成像,位置是圆扇形的细胞边缘扁平板状伪足区域,Z 轴是细胞的最低处。微管网稀疏,背景干净,标记密度高,采样数充足,分辨率高,可以看到清晰的微管中空结构。
⭐ 标记要点:
培养贴壁良好、高活力且细胞体扁平的细胞。
微管是对温度极其敏感的细胞器, 从培养箱取出到固定的全过程,必须严格避免温度波动。
选用适合微管的高保真固定液,防止微管解聚。
为使背景更干净,使用Quench试剂来抑制自发荧光。
使用比常规推荐浓度更高的一抗浓度去进行过饱和标记。
追求极致干净的细胞内背景,需要对细胞质进行抽提,去除细胞质中游离的 tubulin 蛋白,它们也可以被标记从而形成背景。
项目详情:
华东师范大学-黄正齐老师定制项目
标记原料记录
Acti-Stain 555 Phalloidin
https://www.cytoskeleton.com/phdh1
Alexa Fluor™ 532鬼笔环肽
激发/发射波长:531/554 nm
[图片]
https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/A22282
In DMSO,150ul 66um stock
In methano,1.5ml 6.6um stock
选择用methano溶解,需要做浓度titration
MAN0001777_Phalloidins_UG.pdf
检测设备Olympus FV3000
一、【制样原料和环境条件留档】
1.1 原料照片
1.2 环境条件留档:
说明
异常情况备注
环境温度
25℃
环境湿度
30%
染色时工作液温度
25 ℃
偏低,约等于室内温度
染料储存方式
4℃
染料储液浓度
1mM
抗体储存方式
-20℃
抗体储液浓度
1mg/ml
样本类型和名词
BSC1载玻片
样本前处理操作
8%PFA+1.5%GA固定