🔬 实验名称:高保真固定液与 4 种封片剂对微丝结构细节保存的影响
🎯 本章内容:加固定液
🎯 本章内容:加固定液
本章进入正式 加固定液 操作:取出活细胞、吸培养基、加入预热的固定液、保温、循环操作剩余样品。
操作步骤
1step加入预热好的固定液
拿出活细胞,吸出培养基,分别加入预热好的常规固定液和高保真微丝固定液。
⚠️ 温度不能变,设定为 37℃。
💡 实际可设定 38.5℃,按室温浮动微调。
💡 实际可设定 38.5℃,按室温浮动微调。
2step金属浴保温
放到金属浴上保温,设定时间 10 分钟。
保温期间保持样品稳定,不要频繁移动或开盖,以免温度波动。
3step循环操作剩余样品
按相同流程循环操作剩余样品,每皿都按”吸培养基 → 加固定液 → 金属浴 10 分钟”的标准流程走。
🔁 多样品同步处理时建议按编号顺序记录每皿的操作时间,确保所有样品累计固定时间一致。
固定要点
⚠️ 温度不能变,设定为 37℃(实际设定 38.5℃,按照室温浮动设定)。
💡 添加固定液时不要冲着培养皿中间加,培养皿中间有个细胞爬片,要贴着皿壁加进去,避免冲刷到细胞。
4step加固定液手法
操作手法决定贴壁效果与细胞活性保留,关键在于:
- 温度恒定 — 全程 37℃ 不能变
- 贴壁加液 — 沿皿壁缓慢加入,避免冲刷细胞爬片
- 及时保温 — 加完立即放入金属浴,开始 10 分钟倒计时
—— 高保真微丝固定 · 图文实验流程(三)——