案例 02：高保真超分辨级样本-细胞微管活细胞共聚焦成像

⭐ 图像描述：

活细胞共聚焦成像，整个细胞呈现出圆扇形，扁平地铺展在视野中，细胞间的微管呈辐射状排列，连续、均匀、明亮。这是一张 2D 共聚焦成像时间序列，自定义颜色区分亮度，绿色代表信号较高的区域，紫色代表信号较低的区域。

⭐ 标记要点：

1. 梯度测试染料浓度，在无明显细胞毒性情况下，尽可能增加染色浓度和时间；
2. 使用无血清培养基染色，避免血清吸附染料，降低有效染色浓度；
3. 使用标记辅助剂增加标记效率，抑制离子泵外排细胞内的染料；
4. 染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时，使细胞吐出胞内多余染料；
5. 细胞状态和活性极其重要，需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。

✨ 成像要点：

1. 选择扁平圆扇形的细胞，细胞存在异质性，教科书般的辐射状细胞，在一些细胞中通常仅占 5%-7%，精心挑选视野，但是在细胞高活力的情况下，该比例会大幅提升。
2. 活细胞拍摄要电，需要梯度测试曝光条件，在 SNR 足够的情况下，尽可能降低激光和曝光，以延长活细胞拍摄的时间。
3. 锁焦准备：恒温在显微镜上放置十分钟，温度变化和机械形变会全部趋于稳定，更利于锁焦。