⭐ 图像描述:
活细胞共聚焦成像,整个细胞呈现出圆扇形,扁平地铺展在视野中,细胞间的微管呈辐射状排列,连续、均匀、明亮。这是一张 2D 共聚焦成像时间序列,自定义颜色区分亮度,绿色代表信号较高的区域,紫色代表信号较低的区域。
⭐ 标记要点:
梯度测试染料浓度,在无明显细胞毒性情况下,尽可能增加染色浓度和时间;
使用无血清培养基染色,避免血清吸附染料,降低有效染色浓度;
使用标记辅助剂增加标记效率,抑制离子泵外排细胞内的染料;
染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时,使细胞吐出胞内多余染料;
细胞状态和活性极其重要,需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。