案例10：高保真超分辨级样本-细胞微丝、微管活细胞 STED 成像

⭐ 图像描述：

图像选取了细胞圆扇形的胞体，细胞胞体扁平地铺展在视野中，呈现和谐的圆形。细胞内的微丝呈现应力纤维和细丝的表型，微管辐射状。整个细胞骨架呈现小范围的摆动，支撑着细胞圆周对称的结构。
微丝：蓝色；微管：紫色。

⭐ 标记要点：

1. 梯度测试染料浓度，在无明显细胞毒性情况下，尽可能增加染色浓度和时间；
2. 使用无血清培养基染色，避免血清吸附染料，降低有效染色浓度；
3. 使用标记辅助剂增加标记效率，抑制离子泵外排细胞内的染料；
4. 染色完毕后使用完全培养基培养”清洗”染料 6-12 小时，使细胞吐出胞内多余染料；
5. 细胞状态和活性极其重要，需要遵循细胞培养原则养出高活力的细胞。

✨ 成像要点：

1. 完整活细胞成像需注意，STED 扫描时间取决于振幅，且相对时间较长。为保证整个活细胞在扫描时间内没有大幅运动，需要在扁平圆扇形的细胞中，选择整体体积相对较小的，以尽量减少扫描时间。
2. 活细胞拍摄要点，需要梯度测试曝光条件，在 SNR 足够的情况下，尽可能降低激光和曝光，以延长活细胞拍摄的时间。
3. 锁焦/准焦：恒温在显微镜上放置十分钟，温度变化和机械形变全部趋于稳定，更利于锁焦。